Оптимизация эффективности трансфекции клеток А549 плазмидой, кодирующей N-белок вируса SARS-COV-2

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Для тестирования новых противовирусных препаратов, направленных на деградацию нуклеокапсидного белка (N-белка) вируса SARS-CoV-2, желательно иметь клетки с экспрессией N-белка, для чего нужно найти условия для максимально достижимой эффективности трансфекции легочных клеток плазмидой, кодирующей этот белок. Для трансфекции использовали полиплексы, состоявшие из плазмиды, кодирующей N-белок, слитый с флуоресцентным белком mRuby3, и блок-сополимеров полиэтиленимин (ПЭИ)-полиэтиленгликоль (ПЭГ)-ТАТ пептид. Исследовали зависимость эффективности трансфекции клеток аденокарциномы легкого человека А549 от соотношений ПЭГ/ПЭИ и N/P (отношение азота в ПЭИ к фосфату в ДНК). Были показаны достоверные положительные корреляции между эффективностью трансфекции, определенной по данным проточной цитофлуориметрии, соотношением N/P и долей полиплексов, размером 40-54 нм. Полученные данные могут служить основой для создания животной модели, экспрессирующей N-белок вируса SARS-CoV-2 в легких.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

Ю. В. Храмцов

Институт биологии гена Российской академии наук

Автор, ответственный за переписку.
Email: alsobolev@yandex.ru
Россия, Москва

Т. Н. Лупанова

Институт биологии гена Российской академии наук

Email: alsobolev@yandex.ru
Россия, Москва

А. А. Розенкранц

Институт биологии гена Российской академии наук; Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова

Email: alsobolev@yandex.ru
Россия, Москва; Москва

Г. П. Георгиев

Институт биологии гена Российской академии наук

Email: alsobolev@yandex.ru

академик РАН

Россия, Москва

А. С. Соболев

Институт биологии гена Российской академии наук; Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова

Email: alsobolev@yandex.ru

член-корреспондент РАН

Россия, Москва; Москва

Список литературы

  1. Surjit M., Lal S. K. // Infect Genet Evol. 2008. V. 8. P. 397–405.
  2. Wu C., Zheng, M. // Preprints. 2020. 2020020247.
  3. Prajapat M., Sarma P., Shekhar N., et al. // Indian J Pharmacol. 2020. V. 52. P. 56.
  4. Bestion E., Halfon P., Mezouar S., et al. // Viruses. 2022. V. 14. 1507.
  5. Ulasov A. V., Khramtsov Y. V., Trusov G. A., et al. // Mol. Ther. 2011. V. 19. P. 103–112.
  6. Shahbazi S., Haghighipour N., Soleymani S., et al. // Biotechnology letters. 2018. V. 40. P. 923–931.
  7. Hall A., Lachelt U., Bartek J., et al. // Mol. Ther. 2017. V. 25. P. 1476–1490.
  8. Трусов Г. А., Уласов А. В., Белецкая Е. А., и др. // ДАН. 2011. Т. 437. С. 266–268.
  9. Perrine T. D., Landis W. R. // J. Polym. Sci. A1. 1967. V. 5. P. 1993–2003.
  10. Kunath K., von Harpe A., Petersen H. et al. // Pharm. Res. 2002. V. 19. P. 810–817.
  11. Gong X. W., Wei D. Z., He M. L. et al. // Talanta. 2007. V. 71. P. 381–384.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рис. 1. Зависимости эффективности трансфекции клеток А549 от соотношения N/P (отношение азота в ПЭИ к фосфату в ДНК) при разных значениях ПЭГ/ПЭИ в полиплексах. Трансфекцию производили плазмидной ДНК, кодирующей N-белок вируса SARS-CoV-2, слитый с флуоресцентным белком mRuby3. Прямой линией указана линейная корреляция между эффективностью трансфекции и N/P (r =0.783, p =0.013). Указаны средние значения с соответствующей среднеквадратичной ошибкой (n =7–11).

Скачать (23KB)
Метаданные
3. Рис. 2. (а) Зависимость доли полиплексов (за 100% принята доля всех полиплексов) от их гидродинамического диаметра. Серым цветом показана доля полиплексов диаметром 40–54 нм. (б) Зависимость эффективности трансфекции клеток А549 (в процентах трансфицированных клеток от их общего числа) от доли полиплексов диаметром 40–54 нм. Прямой линией указана линейная корреляция между этими параметрами (r =0.796, p =0.010).

Скачать (39KB)
Метаданные

© Российская академия наук, 2025